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原位杂交-武汉思特进公司

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    2021-1-25

夏经理
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  • 单位地址| 湖北省武汉市江夏区高新四路40号葛洲坝
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武汉思特进科技发展有限公司提供原位杂交-武汉思特进公司。






间接标记的方法中应用了报告分子标记的探针,报告分子通过亲和酶促的方法进行显色。常用的报告分子如地高6辛,生物素。结合地高6辛抗6体或链霉亲和素上耦联的酶系统进行间接的底物反应检测。地高6辛标记-的历史可追溯到1987年,由于地高6辛是洋地黄的花和叶中特有的成分,检测时使用的地高6辛抗6体不会结合于其他的生物分子。这是相较于生物素标记系统的优势。地高6辛抗6体上可耦联碱性磷酸酶、-化酶,及荧光分子和胶体金等,根据不同的应用需求,呈现高信噪比的-结果。但需注意,由于引入了免6疫检测反应,在放大检测灵敏度的同时,应注意样品内源性酶的灭活,以降低检测背景。

通过不同标记方法的联合应用,还可在同一样本中实现染色体不同区域或细胞样本中不同rna序列的多重检测。




原位杂交;原位杂交(in situ hybridization)将标记的-探针与细胞或组织中的-进行杂交,称为原位杂交!

使用dna或者rna探针来检测与其互补的另一条链在-或其他真核细胞中的位置。

以菌落原位杂交为例:对分散在若干个琼脂平板上的少数菌落(100-200)进行克8隆筛选时,可采用本方法。将这些菌落归并到一个琼脂主平板以及已置于第二个琼脂平板表面的一张硝5酸纤维素滤膜上。经培养一段时间后,原位杂交,对菌落进行原位裂解。主平板应贮存于4℃直至得到筛选结果。


就dna探针和rna探针的比较,dna探针在杂交过程中会出现探针双链之间退火的可能,也更倾向于在溶液中形成大分子的探针聚合体,从而影响其渗透能力。而rna 探针的应用,将提高dna-rna杂交子的热稳定性。

tips:rna探针因其单链、高分子结合力、可适应高温杂交的特性,其检测特-和灵敏度均优于dna探针。常用的rna探针标记方法为构建质粒后进行转率合成。通过pcr扩增的方法,可以更方便地进行rna探针的制备;rna探针合成后,还需验证其对目标片段检测的灵敏度和特-。




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