杂交流程
原位杂交是指;分子杂交的一种形式。由未经抽-离的染色体dna,在原来位置上被变性成单链后,与探针进行分子杂交。1977年由本顿(w.d.benton)和戴维斯(r.w.davis)在原分子杂交基础上发展的一种较新的分子杂交技术。方法是将菌落或噬菌斑转移到硝9酸纤维素滤膜上,使在原位发生溶菌后变性的dna,同滤膜原位结合,再与有放5射性同位素标记的特定核苷酸“探针”杂交,其结果可用放5射自显影来显示,出现银粒的地方便是待测染色体dna上与探针互补顺序所在的位置。对快速检测转化群落中的dna序列或任何一种插入的dna序列,以及动植物的基因定位工作,都具有广泛应用价值。(见“分子杂交”、“放5射自显影”、“影印培养技术”)
原位杂交 (ish) 是用于定位固定组织和细胞-定-靶标的-技术,能够获得与基因表达和遗传位点相关的时间和空间信息。 虽然ish的基本工作流程与印迹杂交近似,原位杂交,即-探针被合成、标记、纯化和特-靶标退火,但其不同之处在于前者可通过可视化显示组织内的结果来获得更多信息。 如今有两种基本方法来实现可视化显示原位rna和dna靶标,即荧光 (fish) 和显色 (cish) 检测。 每种检测方法本身的特点(见下表)使得fish和cish适用于截然不同的应用。 虽然两种方法均使用标记的、与样本杂交的靶标特-探针,但每种方法用于可视化显示样本的仪器不同。 这里我们将强调每种方法的不同之处和各自的优势。
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