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低温生物菌种——制备

也称种子制备，是指菌种在一定条件下，经过扩大培养成为具有一定数量和的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。种子制备包括孢子制备和菌丝体制备（见图），其中(1)～(4)为孢子制备过程。保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种，用无菌手续挑取少许，接入琼脂斜面培养基上，在25℃（或较高温度）下培养5～7天(或较长时间)。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子，对于霉菌类孢子制备，多数采用大米、小米之类的天然培养基。将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液，接种到扁瓶固体培养基上，于25～28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干，使水分降至10%以下，并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。菌孢子的培养基大多是采用麸皮或豌豆浸出液、-及无机盐与琼脂制成的。将斜面孢子接入扩大的扁瓶孢子培养基中，于28～37℃培养5～14天。所获得的大量孢子可直接作为种子罐 (6)的种子。如果有些生产菌种不产孢子，如产生菌或产孢子不多的，则可采用摇瓶（5）液体培养制得菌丝体，污水处理菌种，作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源（如-）和氮源（如玉米浆等），及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐(7)的种子应是生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮，无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%～20%。

低温生物菌种——常用菌种介绍

侧孢芽孢菌

在-期， 短芽孢菌为革兰氏染色阴性，菌体呈细长的杆状；在对数生长期，为革兰氏染色阳性，菌体成短而粗的杆状；在静止期，革兰氏染色又转为阴性，菌体成细长的杆状，偶尔也能观察到椭圆形的芽孢。图1是50号菌用1%h2so4(ph6.8)负染后的电镜照片：菌体杆状、周生鞭毛、大小约0.88μm×2.2μm。

作为非脊椎动物的病原菌，有关研究人员曾-了这种-的杀线虫能力，由于所-的这些侧孢短芽孢菌菌株都不产生伴孢晶体，所以这些菌株的杀线虫毒力因子并非来自于具有特征性的伴孢晶体。然而，smirnova ta，et al.分离到了2株能形成大的伴孢晶体的侧孢短芽孢菌菌株，这两株菌显示出很强的杀昆虫能力，研究证实，污水处理菌种报价，这种能力与菌体在形成芽孢过程中的伴孢晶体相关。有趣的是，singer的实验表明，一株侧孢短芽孢菌的杀线活性源于一个热稳定蛋白的毒性。所有这些研究表明，污水处理菌种价格，不同侧孢短芽孢菌菌株拥有不同的线虫致病因子。牛秋红研究小组分离到的侧孢短芽孢菌g4菌株具有-的杀线虫功能，但其并不产生伴孢晶体。从该菌株的发酵液里提取的粗蛋白酶液在12h内能杀掉所有测试线虫并在24h内完全降解。从侧孢短芽孢菌g4菌株中纯化出的丝氨酸胞外蛋白酶可水解多种底物，包括胶原和线虫体壁，具有很强的杀线虫能力，组织病理电镜实验证实这种蛋白酶-破坏了线虫体壁。而且，蛋白酶将线虫体壁分解成为一些-酸或小肽，这些营养物使病原--的生长繁殖。该蛋白酶基因异源表达的菌株表现出了明显的杀线虫活性，重组蛋白酶在体外对线虫体壁降解，而蛋白酶缺失菌株丧失了大部分的杀线活性，死的线虫在生测中保持了完整的体壁，表明蛋白酶在线虫侵染中起主要作用。