对于生长的组织培养液中的细胞,首先移除培养基,然后加入0.1m hcl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解;如果裂解不充分,接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心,收集上清直接用于实验。临用前在0.1m hcl中加入0.1%至1%浓度的triton-x 100可增强细胞和组织裂解。在这个浓度范围内,去污剂并不干扰试验的结合部位,但是会适度的增加光密度值。含有triton的样品需利用标准曲线估计浓度,为了较精l确的测定,标准曲线需以相同方式稀释。取1 ml细胞培养上清加入10μl浓-,600g离心力于室温离心,上清液直接用于实验测定分析。
2、要配备20ul、50ul、100ul、1000ul和排各一支。吸取不同的液体后,要更换头。即使是吸取标准品时。
3、要在实验前1小时将试剂盒从冰箱中取出,使各种试剂都恢复到室温,以使结果更稳定。
4、实验时,要使底物避光保存。
5、用吸取液体时速度不能太快,以免产生气泡而使吸取量不准确。
6、吸取液体时,要用量程和需要量接近的去吸,减少误差。
将液体加到酶标孔中时,避免头和孔内液体接触,可使头上的液滴和孔壁接触,液滴会自然流下去。
液体全部加完后,可将酶标板在桌子上平行轻轻晃动30秒,混匀液体。也可以用酶l标仪的晃动功能。
温浴时,人环磷酸腺苷 c- elisa,要用不干胶或胶带纸封好酶标板,防止水分的蒸发。
洗板时,每次洗液加入后,应静置1分钟,使清洗。没有洗板l机时,倒去液体后,要将酶标板在报纸或毛纸上用力拍干。
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