将少数菌落转移到纤维素滤膜上
(1) 在含有选择性的琼脂平板上放一张纤维素滤膜。
(2) 用无菌-将各个菌落先转移至滤膜上,再转移至含有选择性但未放滤膜的琼脂主平板上。应按一定的格子进行划线接种(或打点)。每菌落应分别划线于两个平板的相同位置上。后,在滤膜和主平板上同时划一个含有非重组质粒的菌落。
(3) 倒置平板,于37℃培养至划线的-菌落生长到0.5-1.0mm的宽度。
(4) 用已装防水黑色绘图墨水的针头穿透滤膜直至琼脂,在3个以上的不对称位置作标记。在主平板大致相同的位置上也作上标记。
(5) 用parafilm膜封好主平板,倒置贮放于4℃,rna原位杂交测试服务,直至获得杂交反应的结果。
(6) 裂解-,按本段下面所述方法,使释放的dna结合于纤维素滤膜。
目前,我国已稳定开展的分子病理技术主要有显色原位杂交、荧光原位杂交、pcr、荧光定量pcr、基因芯片和dna测序技术。显色原位杂交(chromogenicinsituhybridization,cish)技术是分子生物学、组织化学及细胞学相结合产生的一门新兴技术,是利用-分子单链间碱基互补的原理,将地1高辛或生物素标记的外源-探针与组织、细胞或染色体上待测dna或rna互补配对,结合成双链杂交分子,通过-化物酶或碱性磷酸酶的呈色反应将待测-在组织、细胞或染色体上的位置显示出来。根据探针种类不同可分为dna原位杂交和rna原位杂交。
分子病理诊断,是指应用分子生物学技术,从基因水平上检测细胞和组织的分子遗传学变化,以协助病理诊断和分型、指导靶向、预测反应及判断预后的一种病理诊断技术。分子病理诊断又称分子病理检查、分子病理检测、分子病理技术。从本质上讲,凡是基于组织和细胞分子水平上的-诊断都是分子病理诊断,这是广义的分子病理诊断,如组化诊断。但目前-的是狭义的分子病理诊断,即基于细胞或组织基因水平的病理诊断。
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